第一步：輸掖泵的選擇:是HPLC系統(tǒng)中zui重要的部件之一。泵的性能好壞直接影響到整個(gè)系統(tǒng)的質(zhì)量和分析結(jié)果的可*性。
應(yīng)具備如下性能：
①流量穩(wěn)定，其RSD應(yīng)<0.5%，這對定性定量的準(zhǔn)確性至關(guān)重要;
②流量范圍寬，分析型應(yīng)在0.1~10 ml/min范圍內(nèi)連續(xù)可調(diào)，制備型應(yīng)能達(dá)100 ml/min;
③輸出壓力高，一般應(yīng)能達(dá)到150~300 kg/cm2;
④液缸容積小;
⑤密封性能好，耐腐蝕。
泵的種類很多，按輸液性質(zhì)可分為恒壓泵和恒流泵。
恒流泵按結(jié)構(gòu)又可分為螺旋注射泵、柱塞往復(fù)泵和隔膜往復(fù)泵。恒壓泵受柱阻影響，流量不穩(wěn)定;螺旋泵缸體太大，這兩種泵已被淘汰。目前應(yīng)用zui多的是柱塞往復(fù)泵。柱塞往復(fù)泵的液缸容積小，可至0.1ml，因此易于清洗和更換流動相，特別適合于再循環(huán)和梯度洗脫;改變電機(jī)轉(zhuǎn)速能方便地調(diào)節(jié)流量，流量不受柱阻影響;泵壓可達(dá)400 kg/cm2。其主要缺點(diǎn)是輸出的脈沖性較大，現(xiàn)多采用雙泵系統(tǒng)來克服。雙泵按連接方式可分為并聯(lián)式和串聯(lián)式，一般說來并聯(lián)泵的流量重現(xiàn)性較好(RSD為 0.1%左右，串聯(lián)泵為0.2~0.3%)，但出故障的機(jī)會較多(因多一單向閥)，價(jià)格也較貴。
第二步：進(jìn)樣器的選擇: 早期使用隔膜和停流進(jìn)樣器，裝在色譜柱入口處。
現(xiàn)在大都使用六通進(jìn)樣閥或自動進(jìn)樣器。
進(jìn)樣裝置要求：密封性好，死體積小，重復(fù)性好，保證中心進(jìn)樣，進(jìn)樣時(shí)對色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。HPLC進(jìn)樣方式可分為：隔膜進(jìn)樣、停流進(jìn)樣、閥進(jìn)樣、自動進(jìn)樣。
1.隔膜進(jìn)樣。用微量注射器將樣品注入專門設(shè)計(jì)的與色譜柱相連的進(jìn)樣頭內(nèi)，可把樣品直接送到柱頭填充床的中心，死體積幾乎等于零，可以獲得*的柱效，且價(jià)格便宜，操作方便。但不能在高壓下使用(如10MPa以上);此外隔膜容易吸附樣品產(chǎn)生記憶效應(yīng)，使進(jìn)樣重復(fù)性只能達(dá)到1~2%;加之能耐各種溶劑的橡皮不易找到，常規(guī)分析使用受到限制。
2.停流進(jìn)樣。可避免在高壓下進(jìn)樣。但在HPLC中由于隔膜的污染，停泵或重新啟動時(shí)往往會出現(xiàn)“鬼峰”;另一缺點(diǎn)是保留時(shí)間不準(zhǔn)。在以峰的始末信號控制餾分收集的制備色譜中，效果較好。
3.閥進(jìn)樣。一般HPLC分析常用六通進(jìn)樣閥(以美國Rheodyne 公司的7725和7725i型zui常見)，其關(guān)鍵部件由圓形密封墊(轉(zhuǎn)子)和固定底座(定子)組成。由于閥接頭和連接管死體積的存在，柱效率低于隔膜進(jìn)樣(約下降5~10%左右)，但耐高壓(35~40MPa)，進(jìn)樣量準(zhǔn)確，重復(fù)性好(0.5%)，操作方便。
4.自動進(jìn)樣。用于大量樣品的常規(guī)分析。
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