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DNA(液體基礎(chǔ)型)恒溫快速擴(kuò)增試劑盒

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)其他

所  在  地北京市

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更新時間:2025-01-06 21:20:06瀏覽次數(shù):46次

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經(jīng)營模式:其他

商鋪產(chǎn)品:87條

所在地區(qū):北京北京市

聯(lián)系人:張經(jīng)理

產(chǎn)品簡介

(貨號:WLB5001)原理概述:本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù):在常溫恒溫下,重組酶和引物形成蛋白/單鏈核苷酸的復(fù)合體Rec/ssDNA,在輔助蛋白和單鏈結(jié)合蛋白SSB的幫助下,侵入雙鏈DNA模板

詳細(xì)介紹

DNA(液體基礎(chǔ)型)恒溫快速擴(kuò)增試劑盒 (貨號:WLB5001

原理概述:

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù):在常溫恒溫下,重組酶和引物形成蛋白/單鏈核苷酸的復(fù)合體Rec/ssDNA,在輔助蛋白和單鏈結(jié)合蛋白SSB的幫助下,侵入雙鏈DNA模板;在侵入位點形成D-loop區(qū)域,并開始對DNA雙鏈進(jìn)行掃描;待找到與引物互補的目的區(qū)域后,復(fù)合體Rec/ssDNA解體的同時,聚合酶也結(jié)合到引物的3’末端,開始鏈的延伸。

產(chǎn)品特點:

本試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、反應(yīng)時間短(僅需30 mins)等優(yōu)點。金屬浴、水浴鍋等即可進(jìn)行反應(yīng)操作,無需購買PCR擴(kuò)增儀等價格高昂的設(shè)備。

引物設(shè)計:

建議使用長度在30-35 bp的引物,引物過短會影響擴(kuò)增速度和檢測靈敏度;引物設(shè)計避免形成二級結(jié)構(gòu)而影響擴(kuò)增;擴(kuò)增子長度建議在150-300 bp,通常不超過500 bp。

試劑盒組成:

組成 含量
C buffer 1mL×2管
L buffer 500 μL×1管
P-core 1.2 mL×1管
B buffer 300 μL×1管
使用說明書 1份

試劑盒儲存:

運輸條件:低溫運輸;

儲存條件:儲存溫度 ≤ -20 oC,避光保存,避免重壓,避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品有效期:6個月。

操作步驟:提前將試劑盒所需組分取出,冰上或低溫下融化(C buffer可室溫融化),震蕩混勻。

1) 向無菌0.2mL PCR管中加入20 μL C buffer、5 μL L buffer;

2) 加入2 μL上游引物、2 μL下游引物;

3) 加入1.5μL dNTPs;

4) 向反應(yīng)管中加入12 μL P-core(步驟1~4可以混合后再分裝至反應(yīng)管中);

5) 向反應(yīng)管中加入2.5μL ddH2O和2.5 μL核酸模板(可根據(jù)核酸濃度和實驗需求調(diào)整加入的核酸模板體積,并相應(yīng)調(diào)整加入的ddH2O體積,至模板與ddH2O總體積為5 μL);

6) 最后向反應(yīng)管中加入2.5 μL B buffer并充分混合(加入B buffer反應(yīng)立即被啟動);上下顛倒混勻后(請務(wù)必保證充分混勻),將反應(yīng)液甩(或快速離心)至管子底部,然后立即將反應(yīng)管放入恒溫設(shè)備中:37~42 oC恒溫孵育,時間30 mins;

7) 反應(yīng)結(jié)束后,如需進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測,請加入50 μL酚/氯仿,1:1抽提反應(yīng)液,12000 rpm離心5 mins,取5 μL上清進(jìn)行電泳檢測。

體系配制

組分 體積(μL)
C buffer 20

5

L buffer
P-core 12
dNTPs(10 mM) 1.5
下游引物(10 μM) 2
下游引物(10 μM) 2
ddH2O和DNA模板 5
B buffer 2.5
總體積 50

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

N:陰性對照; P:正對照

注意事項:

  • 為保證液體試劑組分活性,請保證儲存溫度 ≤ -20 oC;試劑使用時請保持低溫,避免高溫放置過長時間;
  • 在進(jìn)行反應(yīng)時請注意避免微量核酸染,并盡量考慮設(shè)置空白對照以確認(rèn)是否有核酸污染。

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